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【20230309期】特定蛋白方法學(xué)---散射＆透射？
2023-03-16
什么是特定蛋白？
特定蛋白：在人體血清中含有許多蛋白質(zhì),它們來源于組織細(xì)胞,是血清中含有的功能蛋白,執(zhí)行著各種功能,很多疾病都可以引起血清蛋白質(zhì)的變化，蛋白質(zhì)具有良好的抗原性，利用蛋白質(zhì)的抗原性，可以采用抗原-抗體反應(yīng)對具有某一特定抗原性的蛋白質(zhì)進(jìn)行測定，故又稱特定蛋白檢測，可存在于血液、腦脊液、尿液等體液中。
02
特定蛋白檢測基本原理
1、光學(xué)的理論發(fā)展：免疫比濁法是基于比色法的基礎(chǔ)發(fā)展，由雙價(jià)的抗體和單價(jià)的抗原間反應(yīng)產(chǎn)生了免疫沉淀。
2、透射、散射區(qū)別：
透射比濁：檢測由抗原抗體結(jié)合成抗原抗體復(fù)合物，產(chǎn)生的濁度隨抗原量增加而增加，其透光率強(qiáng)度隨之減弱，根據(jù)吸光度值計(jì)算待測抗原的量。
散射比濁：檢測由抗原抗體結(jié)合產(chǎn)生成抗原抗體復(fù)合物顆粒，導(dǎo)致的光散射，散射光強(qiáng)度與單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體復(fù)合物的生成速率成正比。
03
特定蛋白檢測標(biāo)準(zhǔn)化工作
? 1967:WHO 67/86成為首批免疫球蛋白校準(zhǔn)品
? 1980:CAP研制血清蛋白參考物質(zhì)（RPSP-1),隨后又研制出RPSP-2/3/4
? 1993:IFCC研制CRM 470,一種通用的參考物質(zhì)，包含了14種血清特定蛋白，后更名為ERM-DA470
? 2008:IFCC研制出最新的ERM-DA470K/IFCC
? 2010:IFCC為CRP制備液體冰凍參考物質(zhì)ERM-DA472/IFCC,與ERM-DA470K/IFCC使用相同的清池
? 2010:IFCC研制胱抑素C參考物質(zhì)ERM-DA471/IFCC
? 2011:IFCC為CRP研制出新的參考物質(zhì)ERM-DA474/IFCC
04
特定蛋白抗原過剩情況
1、使反應(yīng)信號低于分析測量范圍上限對應(yīng)的檢測信號，結(jié)果出現(xiàn)假性低值
如下圖，不同抗原濃度的兩點(diǎn)具有相同的測量信號：
05
特定蛋白檢測中鉤狀效應(yīng)的影響
鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng)，是指由抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致的假陰性的現(xiàn)象。
抗體過量叫做前帶效應(yīng)；
抗原過剩叫做后代效應(yīng)。
在恒定抗體濃度下增加抗原濃度的免疫沉淀反應(yīng)
免疫比濁法面對抗原過剩的問題，該如何解決？
3、如何處理抗原過剩
儀器反應(yīng)線性參數(shù)的設(shè)置：通過對事件反應(yīng)進(jìn)程曲線的檢測，計(jì)算反應(yīng)不同時(shí)段的速率比值與預(yù)設(shè)的參數(shù)進(jìn)行比較自動(dòng)識別鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)
反應(yīng)近終點(diǎn)時(shí)再添加抗原
*文章圖片來源網(wǎng)絡(luò)，如侵權(quán)請聯(lián)系刪除。
特定蛋白：在人體血清中含有許多蛋白質(zhì),它們來源于組織細(xì)胞,是血清中含有的功能蛋白,執(zhí)行著各種功能,很多疾病都可以引起血清蛋白質(zhì)的變化，蛋白質(zhì)具有良好的抗原性，利用蛋白質(zhì)的抗原性，可以采用抗原-抗體反應(yīng)對具有某一特定抗原性的蛋白質(zhì)進(jìn)行測定，故又稱特定蛋白檢測，可存在于血液、腦脊液、尿液等體液中。
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特定蛋白檢測基本原理
1、光學(xué)的理論發(fā)展：免疫比濁法是基于比色法的基礎(chǔ)發(fā)展，由雙價(jià)的抗體和單價(jià)的抗原間反應(yīng)產(chǎn)生了免疫沉淀。
2、透射、散射區(qū)別：
透射比濁：檢測由抗原抗體結(jié)合成抗原抗體復(fù)合物，產(chǎn)生的濁度隨抗原量增加而增加，其透光率強(qiáng)度隨之減弱，根據(jù)吸光度值計(jì)算待測抗原的量。
散射比濁：檢測由抗原抗體結(jié)合產(chǎn)生成抗原抗體復(fù)合物顆粒，導(dǎo)致的光散射，散射光強(qiáng)度與單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體復(fù)合物的生成速率成正比。
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特定蛋白檢測標(biāo)準(zhǔn)化工作
? 1967:WHO 67/86成為首批免疫球蛋白校準(zhǔn)品
? 1980:CAP研制血清蛋白參考物質(zhì)（RPSP-1),隨后又研制出RPSP-2/3/4
? 1993:IFCC研制CRM 470,一種通用的參考物質(zhì)，包含了14種血清特定蛋白，后更名為ERM-DA470
? 2008:IFCC研制出最新的ERM-DA470K/IFCC
? 2010:IFCC為CRP制備液體冰凍參考物質(zhì)ERM-DA472/IFCC,與ERM-DA470K/IFCC使用相同的清池
? 2010:IFCC研制胱抑素C參考物質(zhì)ERM-DA471/IFCC
? 2011:IFCC為CRP研制出新的參考物質(zhì)ERM-DA474/IFCC
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特定蛋白抗原過剩情況
1、使反應(yīng)信號低于分析測量范圍上限對應(yīng)的檢測信號，結(jié)果出現(xiàn)假性低值
如下圖，不同抗原濃度的兩點(diǎn)具有相同的測量信號：
05
特定蛋白檢測中鉤狀效應(yīng)的影響
鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng)，是指由抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致的假陰性的現(xiàn)象。
抗體過量叫做前帶效應(yīng)；
抗原過剩叫做后代效應(yīng)。
在恒定抗體濃度下增加抗原濃度的免疫沉淀反應(yīng)
免疫比濁法面對抗原過剩的問題，該如何解決？
3、如何處理抗原過剩
儀器反應(yīng)線性參數(shù)的設(shè)置：通過對事件反應(yīng)進(jìn)程曲線的檢測，計(jì)算反應(yīng)不同時(shí)段的速率比值與預(yù)設(shè)的參數(shù)進(jìn)行比較自動(dòng)識別鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)
反應(yīng)近終點(diǎn)時(shí)再添加抗原
*文章圖片來源網(wǎng)絡(luò)，如侵權(quán)請聯(lián)系刪除。